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植物脯氨酸检测试剂盒
 产品货号: PP5040
 产品名称: 植物脯氨酸检测试剂盒
 产品价格/规格: 50次 400元
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 更新时间: 2019-04-30
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    植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)

    Plant Proline Assay Kit with Ninhydrin

    产品组成:

    组分货号

    名称

    规格

    贮存

    PP5040-01

    试剂1-Pro裂解液

    100 ml

    RT

    PP5040-02

    试剂2-Pro标准液

    1 ml

    4℃

    PP5040-03

    试剂3-Pro显色液

    50 ml

    RT 避光

    ●     产品简介:

    脯氨酸(Proline,Pro)是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为6.30,易溶于水。在正常环境情况下脯氨酸含量?#31995;停?#20294;在逆境下(旱、?#21462;?#20919;、冻、盐碱等),脯氨酸常有明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关。植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸与茚三酮共热发生反应,能产生稳定的红色产物,以分光光度计测定处吸光度,在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度?#28903;取?

    该试剂盒不使用传统的磺基水杨酸和甲苯等有害溶剂,经济环保。

    该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量,不适用于动物及?#25605;?#26679;品中脯氨酸的测定。

    按照一次使用1 ml Pro显色液计算,试剂盒可以使用50次。

    自备材料:

    植物根茎、叶子等;剪刀;螺盖离心管或锁盖离心管或96?#35013;澹?ml玻璃比色皿;分光光度计或酶标仪;水浴锅或干浴器;离心机

    操作步骤:

    1 样本处理:

    取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,剪碎,迅速称取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液(建议使用1.5ml螺口离心管或锁盖离心管),沸水浴或干浴处理20分钟 (期间间歇混匀),10000rpm离心 2分钟,上清?#27425;?#33071;氨酸提取液,4℃保存备用。待测提取液如不能及时测定,应置于-20℃保存,1-2天内稳定。

    2 Pro显色液的配制:

    ?#30740;?#31649;装的茚三酮粉末,全部加入到茚三酮溶解液中,剧?#19968;?#21248;至完全溶解,?#30913;?#25104;Pro显色液。注意:Pro显色液具有一定腐蚀性,请小心操作。

    3 配制系列脯氨酸标准溶液:

    取1ml 试剂1-Pro裂解液全部加入到装有Pro标准液的小管中,混匀后彻底溶解,?#30913;?#25104;的Pro标准液(100mg/ml)。

    取1 μl 100mg/ml 标准液加入到1ml Pro裂解液中,?#30913;?#25104;100μg/ml Pro标准液待用。参照下表配制1-6号不同浓度的Pro标准溶液。

    编号

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    100μg/ml Pro标准液加入量(ml

    0.01

    0.02

    0.04

    0.06

    0.08

    0.10

    0.15

    0.2

    Pro裂解液(ml

    0.49

    0.48

    0.46

    0.44

    0.42

    0.4

    0.35

    0.3

    脯氨酸含量(μg

    1

    2

    4

    6

    8

    10

    15

    20

    4 样品测定:

    = 1 \* GB3 分光光度计测定:参考下表设置反应混合液,依次加入试剂:

     

    空白管

    标准管

    测定管

    试剂1-Pro裂解液

    0.5 ml

    -

    -

    步骤1中的脯氨酸提取液

    -

    -

    0.5 ml

    Pro标准液(步骤31-8管)

    -

    0.5 ml

    -

    试剂3-Pro显色液

    1 ml

    1 ml

    1 ml

    = 2 \* GB3 酶标仪测定:参考下表设置反应混合液,依次加入试剂:

     

    空白管

    标准管

    测定管

    试剂1-Pro裂解液

    50 μl

    -

    -

    步骤1中的脯氨酸提取液

    -

    -

    50 μl

    Pro标准液(步骤31-8管)

    -

    50 μl

    -

    试剂3-Pro显色液

    100 μl

    100 μl

    100 μl

    ③ 水浴煮沸或干浴20分钟,间歇混?#21462;?#21152;热时务必注意避免液体暴沸溅出,可使用锁盖离心管或螺旋盖离心管。

    ④ 冰浴或流水冷却至室温,10000 rpm离心 2分钟,如发?#32622;?#26377;不溶物,也可以不离心。 

    ⑤ 取上清,用空白管作为对照,用分光光度计或酶标仪检测分别测定反应混合液520nm吸光度值。 

    5 计算:

    以系列脯氨酸标准(1-6号管)含量(μg)为横坐标,以?#26434;?#30340;吸光度为纵坐标,制作标?#35760;?#32447;,根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸含量。




    植物组织样品脯氨酸含量(μg/g)=(C×VT)/(W×VS)

    C=从标?#35760;?#32447;上查得的脯氨酸含量(μg)

    VT=步骤1中脯氨酸提取液总体积(ml)

    W=步骤1中使用的样品?#25163;?g)

    VS=步骤4中测定时加入的脯氨酸提取液体积(ml)


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