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超低分子量蛋白电泳试剂盒
 产品货号: RTD6120
 产品名称: 超低分子量蛋白电泳试剂盒
 产品价格/规格: 10次/1000元
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 更新时间: 2019-10-18
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  • 超低分子量蛋白电泳试剂盒(货号:RTD6120

    ●     产品组成:

    组分货号

    组分

    名称

    规格

    贮存

    RTD6121

    组分1

    2×多肽电泳分离胶缓冲液

    30 ml

    4

    RTD6122

    组分2

    2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

    15 ml

    4

    AC1914

    组分3

    40%PAA(19:1)

    25 ml

    4

    AC2914

    组分4

    40%PAA(29:1)

    5 ml

    4

    AA0486

    组分5

    10% APS(干粉)

    0.5 g

    室温

    TA0761

    组分6

    TEMED

    1 ml

    室温

    AB080

    组分7

    10×阳极缓冲液(下槽缓冲液)

    250 ml

    常温

    CB010

    组分8

    10×阴极缓冲液(上槽缓冲液)

    200 ml(干粉)

    室温

    TP050

    组分9

    2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂)

    1 ml

    -20

    RTD6201

    组分10

    考马斯亮蓝快速染色液

    500 ml

    4

    产品简介:

    本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂,可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。具有以下特点:

    1 适用范围广:2×电泳缓冲液中?#32531;?#26377;SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。

    2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5kD多肽。

    3 稳定性高:凝胶缓冲液pH为中性,存放时间长。

    使用说明:

    . 10% APS配制:

    10% APS配制-5 ml将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个?#38534;?#33509;发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10%APS。

    . 制胶:

    I 配制分离胶

    1.按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混?#21462;?

    2.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,?#32531;?#22312;分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层,使凝胶表面保?#21046;?#25972;。

    3.静置10-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

    表一  (一块0.75mm mini胶用量)*

     

    分离胶

    浓缩胶

     

    18T, 5%C /5.0 ml

    5T, 3.3%C/2 ml

    2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

    /

    1 ml

    2×多肽电泳分离胶缓冲液

    2.5 ml

    /

    40%PAA19:1

    2.25 ml

    /

    40%PAA29:1

    /

    0.25 ml

    0.25 ml

    0.75 ml

    10APS

    45-60 μl**

    20-30 μl

    TEMED

    5 μl

    2 μl

    注:*  如非必须,不要使用厚度1.0mm和1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

    ** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度?#32454;?#26102;,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    II 配制浓缩胶

    去除覆盖在分离胶?#31995;?#27700;层,用滤纸将残留的水吸去。

    1.按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混?#21462;?

    2.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    3.静置30-60分钟待凝胶聚合

    . 电泳:

    电泳前,将10×阳极缓冲液AB080)稀释成1×阳极缓冲液备用?#35805;?#29031;标签说明配制10×阴极缓冲液,用蒸馏水稀释成1×阴极缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液,内槽加入1×阴极缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[TP050]处理)加入点样孔,150V稳压电泳,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时?#32431;?#20572;止电泳(表二)。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

    注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。

    表二 多肽电泳标准电泳条件

    电压

    150V

    开始电流

    60-75mA

    结束电流

    15-25mA

    电泳时间

    2.5-3小时

     

    . 染色(使用组分8-考马斯亮蓝快速染色液):

    ?#20204;氨囟粒?

    a 考马斯亮蓝快速染色液不同于实验?#39029;?#29992;的考马斯亮蓝G-250染色液(0.025% G-250,10%冰醋酸),快速染色液不仅具有染色多肽功能外,还具有固定小肽的作用,使得小肽不容?#33258;?#26579;色和脱色中从PAGE中漂离。常规的G-250染色液在染色中,低于5KD的小肽容易从胶中漂离。

    b 使?#20204;?#22914;发?#21046;?#20013;有少许沉淀,请混匀后使用。

    c 以?#38534;?#20351;用方法?#31508;?#38024;对0.75mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。

    1. 漂洗:

    将电泳后的PAGE胶取下放入微波炉专用塑料容器中,加入适量超纯水(以刚刚覆盖过胶面为适),微波炉中高火(700-800瓦)加热,至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟;取出容器均匀摇动数下;重复上述步骤2-3次;弃尽水溶液。

    2. 染色:

    加入适量染色液(用量根据凝胶面积的大小及容器大小而定,以浸没胶面为准),放入微波炉中高火(700-800瓦)加热,溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟;取出容器均匀摇动数下;重复上述步骤数次,直至蛋白条带清晰可见时?#32431;?#20572;止加热;弃去染色液(收集到备用容器中,可以反复利用1-2次)。

    注:a 此步骤是染色的关键步骤,染色停止的标准是条带清晰可见。如由于挥发导致染色液减少,可适当补加染色液。

    b 如使用1.0mm或更厚的凝胶,染色煮沸时间会相应延长。

    3. 脱色:

    加入适量超纯水(以刚刚覆盖过胶面为适),放入微波炉中高火(700-800瓦)加热,至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟;取出容器均匀摇动数下;重复上述步骤1-2次,此时PAGE胶的蓝色背景应已去除

    4. 保存:

    弃去水溶液,加入适量超纯水,观察和保存染色结果。

    染色液使用注意事项:

    1) 使用方法中?#27597;?#31181;参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长各步骤的时间。

    2) 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性没有明显下降。

    3) 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,4℃密封保存。

     

    缓冲液配方

    1 40%PAA(19:1)(100ml) (Cat:AC1914)

    丙稀酰胺       38g

    甲叉双丙稀酰胺 2g

    用ddH2O溶解后定容至100ml,过滤后使用。

    2 40%PAA(29:1)(100ml) (Cat:AC2914)

    丙稀酰胺       38.67g

    甲叉双丙稀酰胺  1.33g

    用ddH2O溶解后定容至100ml,过滤后使用。

    3 10x 阳极缓冲液 (500 ml)    (Cat:AB080) 

    组分浓度:2 MTris pH8.9

    Tris base 121.1 g

    adjust the pH to 8.9 at25

    ddH2O     to 500 ml 

    4 10x 阴极缓冲液 (1 L)    (Cat:CB010) 

    组分浓度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS, pH 8 .3

    Tris base 121.1 g

    Tricine    179.2 g

    SDS         10 g

    ddH2O     to1 L 

    Do not adjust the pH (~pH 8.3)

    5 2×Tricine蛋白样品加样缓冲液(10ml)  (Cat:TP050)

    组分浓度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250,

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31gDTT

    2mg 考马斯亮蓝G-250

    用灭菌ddH2O定容至10ml

    混匀分装-20℃贮存备用



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